Rickettsial pathogens circulating in urban districts of Rio de Janeiro, without report of human Brazilian Spotted Fever / Circulação de patógenos riquetsiais em bairros urbanos do Rio de Janeiro sem relatos humanos da Febre Maculosa Brasileira

Abstract Spotted fever group rickettsioses are emerging diseases. In some of these diseases, domestic dogs act as sentinels. Canine serological studies have demonstrated that rickettsial dispersion is concentrated in rural areas, seroprevalence being higher where human rickettsioses are endemic. In Rio de Janeiro, the Atlantic forest vegetation has been devastated by urbanization. In this context, we aimed to detect Rickettsia spp. in urban areas of the West Zone of Rio de Janeiro. Sera from 130 dogs were tested by Indirect Immunofluorescence Assay, and ticks collected from these dogs were tested by polymerase chain reaction. We found the rate of serological reactions against R. rickettsii and R. parkeri in our study area to exceed those of rural and non-endemic areas, highlighting the importance of dogs as urban sentinels. The possibility of contact with opossums and capybaras increased the chances of exposure to Rickettsia spp., reinforcing the hypothetical link between the landscape and the rickettsial wild cycle. Rhipicephalus sanguineus sensu lato was the tick most frequently observed. PCR-positive samples showed similarity with R. rickettsii and R. felis, an emerging pathogen rarely reported from ticks. We observed that rickettsiae circulate in urban places and ticks from indoor environments, which may be involved in bacterial epidemiology.

Resumo Riquetsioses do Grupo da Febre Maculosa são doenças emergentes. Em algumas destas doenças, os cães domésticos agem como sentinelas. Estudos sorológicos caninos têm demonstrado que a dispersão de patógenos rickettsiais está concentrada em áreas rurais, sendo a soroprevalência maior onde as rickettsioses humanas são endêmicas. Na cidade do Rio de Janeiro, a vegetação de Mata Atlântica vem sendo devastada pela urbanização. Nesse contexto, objetivou-se detectar a presença de Rickettsia spp. em áreas urbanas da Zona Oeste do Rio de Janeiro. Amostras de soro obtidas de 130 cães foram testadas, utilizando-se a Imunofluorescência Indireta. Carrapatos coletados desses cães foram testados, utilizando-se a reação em cadeia da polimerase. Observou-se que as taxas de reações sorológicas contra R. rickettsii e R. parkeri nessa área de estudo excederam a prevalência das áreas rurais e não endêmicas, destacando-se a importância dos cães como sentinelas urbanos das rickettsioses. A possibilidade de contato com capivaras e gambás favoreceu a exposição à Rickettsia spp., reforçando a hipótese de ligação entre a paisagem local e o ciclo silvestre de transmissão riquetsial. O carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato foi encontrado com maior frequência. Amostras com positividade pela PCR mostraram similaridade com R. rickettsii e R. felis, um patógeno emergente raramente descrito em carrapatos. Observou-se circulação riquetsial em áreas urbanas e em carrapatos obtidos do ambiente doméstico, os quais podem estar envolvidos na epidemiologia dessas bactérias.

Spotted fever group rickettsial infection in dogs and their ticks from domestic-wildlife interface areas in southeastern Brazil / Infecção por rickettsias do Grupo da Febre Maculosa em cães e carrapatos de áreas de interface doméstico-silvestre no sudeste Brasileiro

Abstract Rickettsia rickettsii is the causative agent of Brazilian spotted fever (BSF), for which humans and dogs are both susceptible. Dogs are sentinels in serological surveys, however, canine disease is rarely reported. Therefore, we aimed to evaluate natural infection by spotted fever group (SFG) Rickettsia spp. in dogs and ticks collected from domiciles close to forest fragments, featuring domestic-wildlife interface areas. Samples from 115 dogs and 135 ixodids were assessed by polymerase chain reactions (PCR) targeting the gltA gene for Rickettsia spp. and the ompA gene for the SFG rickettsial species. One dog (0.87%; 1/115) was positive for R. rickettsii. This dog presented nonspecific laboratory and clinical abnormalities (thrombocytopenia, hyperproteinemia, lymph node enlargement, emaciation, anorexia, and lethargy). Rickettsia parkeri was identified in 2.96% (4/135) of the ticks (Amblyomma sculptum, A. aureolatum, and Rhipicephalus sanguineus). This study confirmed the presence of SFG bacteria in non-endemic and preserved locations, where domestic and wild populations interact. We reinforce the fact that the dog is susceptible to natural R. rickettsii infection. Although this is a rare finding, preventive measures should be taken against BSF in the studied areas. Finally, R. parkeri infection is possibly being demonstrated in A. sculptum for the first time.

Resumo Rickettsia rickettsii é o agente causador da Febre Maculosa Brasileira (FMB), doença na qual humanos e cães são susceptíveis. Os cães são sentinelas nos inquéritos sorológicos, contudo, a doença canina é raramente descrita. Assim sendo, objetivou-se avaliar a infecção natural por Rickettsia spp. do Grupo da Febre Maculosa (GFM) em cães e carrapatos obtidos de domicílios próximos a fragmentos de mata, caracterizando áreas de interface doméstico-silvestre. Amostras de 115 cães e 135 ixodídeos foram avaliadas pela reação em cadeia da polimerase (PCR) tendo como alvo o gene gltA de Rickettsia spp. e o gene ompA das espécies do GFM. Um cão (0,87%; 1/115) foi positivo para R. rickettsii. Este animal apresentou alterações clínicas e laboratoriais inespecíficas (trombocitopenia, hiperproteinemia, linfonodos edemaciados, emagrecimento, anorexia e letargia). Rickettsia parkeri foi identificada em 2,96% (4/135) dos carrapatos (Amblyomma sculptum, A. aureolatum e Rhipicephalus sanguineus). Este estudo confirmou a presença de bactérias do GFM em locais preservados e não endêmicos, onde populações domésticas e silvestres interagem. Reforçamos o fato do cão ser susceptível à infecção natural por R. rickettsii. Embora este seja um achado raro, medidas preventivas devem ser tomadas contra a FMB nas áreas estudadas. Em última análise, a infecção por R. parkeri possivelmente está sendo demonstrada pela primeira vez em A. sculptum.

An autochthonous case of malaria in Petrópolis, Rio de Janeiro, Brazil

In Brazil, about 99% of malaria cases occur in Brazil's Legal Amazon. In all other states malaria has been noted but with imported cases. Here we describe an autochthonous case of malaria in Petropolis city, Rio de Janeiro. The clinical symptoms and epidemiological aspects were compatible with malaria and the presence of Plasmodium was confirmed through molecular diagnostic testing performed on a blood sample from a local resident after an ecological hike in the Atlantic Forest on the outskirts of town. After treatment with chloroquine and primaquine, the symptoms ceased. This city was regarded malaria free for many years although it still presents the malaria vectors. Considering that Plasmodium sp. is an important cause of morbidity and mortality worldwide, this clinical case serves as an epidemiological alert.

Circulation of spotted fever group rickettsiae among dogs seropositive for Leishmania spp. in an urban area of Brazil

Abstract INTRODUCTION: Dogs play an epidemiological role in several vector-borne diseases that affect human and animal health worldwide. We aimed to identify rickettsial circulation among dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL) from a region endemic for both diseases. METHODS: CVL-seropositive dogs were screened for spotted fever group rickettsiae using an indirect immunofluorescence assay. RESULTS: Among the CVL-positive dogs, anti-Rickettsia rickettsii antibodies were identified in one asymptomatic and one oligosymptomatic dog. CONCLUSIONS: This study shows low circulation of antibodies to R. rickettsii in CVL-seropositive dogs. It is recommended that surveillance studies in dogs should continue in order to monitor this scenario.

Clinical and hematological evaluation of Rangelia vitalii-naturally infected dogs in southeastern Brazil / Avaliação clínica e hematológica de cães naturalmente infectados por Rangelia vitalii no sudeste do Brasil

Abstract Rangelia vitalii, a tick-borne piroplasm that infects dogs, has been recently molecularly characterized in Brazil, Uruguay and Argentina. Studies on molecular characterization of these piroplasms in different Brazilian regions are scarce. The aim of this study was to evaluate clinical and hematological changes in dogs caused by R. vitalii in the mountainous region of the state of Rio de Janeiro. Blood samples from 36 dogs were evaluated for piroplasms and hematological disorders using light microscopy and molecular analysis. Blood samples from all the animals included in this study were confirmed to be positive for R. vitalii through genetic sequencing. Clinical signspresented by 24 of the 36 dogs of the study were evaluated during appointments or hospitalization within private practice. The most frequent clinical disorders in these dogs that were naturally infected with R. vitalii were fever, spontaneous cutaneous bleeding and diarrhea. Normochromic non-regenerative anemia and thrombocytopenia were the most common hematological disorders in these R. vitalii-positive dogs and therefore should be considered in hematological evaluations on suspected cases.

Resumo Rangelia vitalii, um piroplasma transmitido por carrapatos que infecta cães, foi sendo recentemente caracterizado molecularmente no Brasil, Uruguai e Argentina. Nas diferentes regiões brasileiras são escassos os estudos acerca da caracterização molecular destes piroplasmídeos. O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações clínicas e hematológicas em cães causadas por R. vitalii na região serrana do Rio de Janeiro. Amostras de sangue total de 36 cães foram examinadas quanto à presença de piroplasmas pela microscopia de luz, alterações hematológicas e análise molecular. Todos os cães do presente estudo foram positivos para R. vitalii através do sequenciamento genético. Dos 36 animais positivos para R. vitalii, 24 foram avaliados clinicamente. As alterações mais frequentemente observadas foram febre, sangramento cutâneo espontâneo e diarréia. Anemia normocítica normocrômica arregenerativa e trombocitopenia foram as alterações hematológicas mais observadas em cães positivos para R. vitalii, devendo ser consideradas na avaliação hematológica de cães suspeitos.

Pesquisa de hemoglobinopatias em cães da região metropolitana do Rio de Janeiro portadores de anemia crônica / Search for hemoglobinopathies in dogs with chronic anemia in the metropolitan region of Rio de Janeiro

Talassemias e hemoglobinopatias são condições hereditárias encontradas em humanos de todo o mundo. Em medicina veterinária, o polimorfismo de hemoglobinas tem sido estudado em animais de produção, mas não existem relatos de hemoglobinopatias em cães, e os estudos envolvendo o polimorfismo de hemoglobinas nesta espécie são escassos. Com o objetivo de pesquisar variantes da hemoglobina em cães, foram coletadas amostras de sangue de 202 caninos de variadas raças, sendo 130 portadores de anemia crônica (Grupo Experimental) e 72 animais clinicamente saudáveis (Grupo Controle). Estas amostras foram submetidas à eletroforese alcalina de hemoglobinas, que permitiu a separação e quantificação das frações de hemoglobina por densitometria, e posteriormente submetidas à eletroforese de hemoglobinas em meio ácido, técnica utilizada em medicina humana para a separação de frações de hemoglobinas variantes que não se diferenciam em meio alcalino. O eritrograma e índices hematimétricos foram obtidos concomitantemente. Os métodos utilizados demonstraram que a HbA é o maior componente da hemoglobina canina, e que uma pequena quantidade de HbA2 pode ser detectada em uma parcela dos animais avaliados, sendo que a maioria dos caninos apresentava exclusivamente HbA em sua composição. Concluiu-se que a presença ou ausência de HbA2 não interfere nos índices hematimétricos dos animais avaliados, e que quando comparadas as hemoglobinas dos grupos Experimental e Controle, não são observadas diferenças na distribuição das frações destas, além de não serem observadas hemoglobinas variantes nos caninos avaliados.(AU)

Thalassemias and hemoglobinopathies are hereditary conditions found in humans throughout the world. In veterinary medicine, hemoglobin polymorphism has been studied in production animals, but there are no reports of hemoglobinopathies in dogs, and studies involving hemoglobin polymorphism in this species are scarce. In order to search for hemoglobin variants in dogs, blood samples were collected from 202 dogs of various breeds, being 130 patients with chronic anemia (Experimental Group) and 72 clinically healthy animals (Control Group). These samples were subjected to alkaline electrophoresis of hemoglobin, which permitted separation and quantification of hemoglobin fractions by densitometry, and then subjected to hemoglobin electrophoresis in an acid medium, a technique used in human medicine for the separation of variant fractions of hemoglobin that do not differentiate in an alkaline medium. The erythrogram and RBC indices were obtained concurrently. The methods demonstrated that HbA is the major component of canine hemoglobin, and a small amount of HbA2 can be detected in some of the evaluated animals, and most dogs showed only HbA in its composition. It was concluded that the presence or absence of HbA2 does not interfere with RBC indices of evaluated animals, and the comparison between the hemoglobin of Experimental and Control groups showed no differences in fractions distribution between them, and there was no hemoglobin variants in evaluated canines.(AU)

Frequency and molecular characterisation of Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar, Entamoeba moshkovskii, and Entamoeba hartmanni in the context of water scarcity in northeastern Brazil

This study aimed to estimate the frequency, associated factors, and molecular characterisation of Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar, Entamoeba moshkovskii, andEntamoeba hartmanni infections. We performed a survey (n = 213 subjects) to obtain parasitological, sanitation, and sociodemographic data. Faecal samples were processed through flotation and centrifugation methods.E. histolytica, E. dispar, E. moshkovskii, and E. hartmanni were identified by nested-polymerase chain reaction (PCR). The overall prevalence of infection was 22/213 (10.3%). The infection rate among subjects who drink rainwater collected from roofs in tanks was higher than the rate in subjects who drink desalinated water pumped from wells; similarly, the infection rate among subjects who practice open defecation was significantly higher than that of subjects with latrines. Out of the 22 samples positive for morphologically indistinguishableEntamoeba species, the differentiation by PCR was successful for 21. The species distribution was as follows: 57.1% to E. dispar, 23.8% to E. histolytica, 14.3% toE. histolytica and E. dispar, and 4.8% E. dispar and E. hartmanni. These data suggest a high prevalence of asymptomatic infection by the group of morphologically indistinguishable Entamoeba histolytica/dispar/moshkovskiicomplex and E. hartmanni species. In this context of water scarcity, the sanitary and socioenvironmental characteristics of the region appear to favour transmission.

Diagnóstico parasitológico e molecular de enteroparasitos entre crianças residentes e funcionários de uma institução beneficente para menores no município de Niterói-RJ, Brasil / Parasitological and molecular diagnosis of enteroparasites among resident children and employees of a child care institution at Niterói city, RJ, Brazil

Os enteroparasitos são causa importante de agravos à saúde humana e podem interferir de forma significativa no desenvolvimento infantil. Embora as formas de transmissão sejam bemdocumentadas, a desinformação e as precárias condições socioeconômicas de alguns segmentos da população ainda são fatores que contribuem para a manutenção de parasitos no País, viabilizando a transmissão. Este estudo foi realizado entre crianças residentes e funcionários de uma instituiçãofilantrópica religiosa, situada na cidade de Niterói, Rio de Janeiro, consistindo em um ciclo de palestras educativas, seguido da coleta de amostras fecais para diagnóstico coproparasitológico.Foram coletadas 68 amostras fecais frescas e encontrados enteroparasitos em 41 delas (60 por cento),sendo o Blastocystis hominis o parasito mais prevalente (44 por cento). Adicionalmente, sete amostrasforam positivas para o complexo Entamoeba histolytica/E. dispar, sendo uma confirmada como E. histolytica pelo ELISA para pesquisa de coproantígeno. Em 37 amostras de fezes foi pesquisadaa presença de E. histolytica e E. dispar pela técnica de Nested-PCR. Entre essas, 12 (32 por cento) amplificaram um fragmento de 195 pb quando utilizados primers específicos para E. dispar, não havendo amplificação de qualquer produto com os primers de E. histolytica. Estudo feito no entornoda instituição revelou acúmulo de lixo e a presença de saídas de esgoto no peridomicílio, as quais desembocavam nas proximidades da área de lazer das crianças. É possível que esses pontos sejam responsáveis pela contaminação do solo e mesmo incriminados como uma das possíveis fontes deinfestação para as crianças.

Intestinal parasites are important agents of human diseases, besides being responsible for impairingchildhood development. Although transmission is well known, lack of information and precarioussocial and economic conditions are risk factors that allow maintenance of parasite cycles, favoringtransmission. This study was carried out among resident children and employees of a Catholic Institution, located in Niterói, Rio de Janeiro, and consisted of delivering lectures and collectingfresh stool samples, which were processed through the Willis and Hoffman, Pons and Janermethods. Enteroparasites were found in 41 samples (60 percent) and Blastocystis hominis was the mostprevalent (44 percent). Additionally, in seven samples where microscopic examination was positive forthe E. histolytica/E. dispar complex an ELISA was employed to detect E. histolytica and only onereacted positively in the immunoassay. In 37 samples a Nested-PCR was carried out for detectionof E. histolytica and E. dispar and in 12 samples (32 percent) a product with 195 bp was observed usingE. dispar primers, while there was no amplification product with E. histolytica specific primers. As the Institution has a good pattern of hygiene not related with the results, a superficial analysis of its peripheral area was carried out and showed lots of garbage in the neighborhood and sewage outflowinto the play area of the Institution. We concluded that these points may be responsible for the soil contamination and could be incriminated as one of the sources of infection in the children.

Detection and molecular characterization of piroplasms species from naturally infected dogs in southeast Brazil / Detecção e caracterização molecular de piroplasmas em cães naturalmente infectados no Sudeste do Brasil

Rangelia vitalii is a protozoon described from dogs in the south and southeast regions of Brazil. It is phylogenetically related to Babesia spp. that infects dogs, but data on this enigmatic parasite is still limited. The aim of this work was to detect piroplasm species in dogs in the state of Rio de Janeiro, Brazil, by 18S rRNA gene-based PCR assay, restriction fragment length polymorphism (RFLP) and sequence analyses. Of 103 dogs examined, seven (6.8%) were positive for Babesia spp. by PCR. The amplified products were digested by restriction enzymes to differentiate the Babesia species, and one sample was identified as Babesia vogeli. The pattern observed for the other six amplification products did not match with pattern described for large Babesia infecting dogs. Sequencing analysis confirmed these six samples as R. vitalii, with high homologies (99-100%) with a sequence from south Brazil. This study confirms the presence of Babesia vogeli and Rangelia vitalii circulate in domestic dogs in Teresópolis, Rio de Janeiro, Brazil.

Rangelia vitalii é um protozoário que infecta cães e foi descrito nas regiões Sul e Sudeste do Brasil. R. vitalii é filogeneticamente próxima à Babesia spp., mas dados deste misterioso parasito ainda são escassos. O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de piroplasmas em cães naturalmente infectados no estado do Rio de Janeiro, através da amplificação do gene 18S rRNA pela PCR, clivagem com enzimas de restrição (RFLP) e caracterização genética através do sequenciamento. De 103 cães, sete (6,8%) foram positivos para Babesia spp. pela PCR. Os produtos amplificados foram digeridos por enzimas de restrição para a diferenciação das espécies de Babesia e uma amostra foi identificada como Babesia vogeli. O padrão de amplificação observado nas outras seis amostras não correspondeu ao padrão descrito para babesias que infectam cães. O sequenciamento das seis amostras confirmou ser uma espécie geneticamente idêntica a R. vitalii apresentando grande homologia (99-100%) com a sequência do sul do Brasil. Este estudo confirma a presença de Babesia vogeli e Rangelia vitalii infectando cães em Teresópolis, Rio de Janeiro, Brasil.

Seleção de transcritos diferenciais pertencentes as duas linhagens filogenéticas principais de Trypanossoma cruzi / Pertaining distinguishing transcript election the two main ohylogenetics ancestries of Trypanossoma cruzi

Embora o Trypanosoma cruzi exiba um considerável polimorfismo genético, várias evidências mostram que este parasita pode ser agrupado em duas linhagens filogenéticas principais ou grupos, relacionado ao seu aspecto epidemiológico. Assim, o grupo T. cruzi I encontra-se associado ao ciclo silvestre e T. cruzi II à infecção humana. Neste trabalho foi utilizada a técnica da Análise da Representação Diferencial – RDA para estudar a divergência entre as duas linhagens filogenéticas principais do T. cruzi. A RDA baseia-se na amplificação subtrativa de fragmentos de DNA da população alvo quando hibridizadas com fragmentos de DNA da população referência. Moléculas comuns a ambas as populações anelam-se entre si, restando moléculas específicas da população referência e moléculas específicas da população alvo. Estas últimas são amplificadas exponencialmente pela presença de adaptadores ligados às suas extremidades 5’. Para esses ensaios nós utilizamos cepa F (T. cruzi I) como população alvo e a cepa Y (T. cruzi II) como referência e vice-versa. Dois clones (F#30 e Y#22) que se mostraram específicos para cada linhagem foram caracterizados. A seqüência nucleotídica do clone F#30 mostrou alta similaridade com uma proteína hipotética de T. cruzi e o clone Y#22 com a região 5’UTR do gene da trans-sialidase. Quando utilizados como marcadores moleculares, o clone F#30 mostrou um padrão de hibridização específico para cepas do Amazonas e o clone Y#22 com cepas do Piauí. Foi também utilizada a técnica da Representação Diferencial da Expressão – RDE para estudar a expressão diferencial entre as duas linhagens filogenéticas principais de T. cruzi. A metodologia é a mesma descrita para RDA, porém utilizando moléculas de cDNA, a partir de mRNA. Em um grupo de experimentos, foram utilizadas moléculas de cDNA da cepa D7 (T. cruzi I) como população alvo e moléculas de cDNA da cepa GLT593 (T. cruzi II) como população referência e em outro grupo de experimentos, vice-versa. Um clone...

Colonizacao de ecotopos artificiais pelo Panstrongylus mengistus na ilha de Santa Catarina, Florianopolis, Santa Catarina, Brasil / Colonization of artificial ecotopes by Panstrongylus megistus at Santa Catarina island, Florianopolis, Santa Catarina

Objetivando verificar a colonizacao de Panstrongylus megistus em ecotopos artificiais em florianopolis foram examinados, de 1985 a 1992, 779 anexos peridomiciliares (524 galinheiros, 46 currais e 209 ranchos) em 9 localidades e 443 domicilios no distrito de lagoa, todos na ilha de Santa Catarina. Todo o ecotopo, incluindo forro e porao das casas, era examinado apos aplicacao de liquido insetifugo (Pirisa a 5 por cento). A pesquisa nos anexos peri-domiciliares revelou 3 galinheiros e um rancho positivo no distrito de Lagoa, onde foram tambem encontrados 2 domicilios colonizados pelo P. megistus, com a captura de ovos, ninfas e adultos em todos os ecotopos...